如何選購適合自己的熒光定量PCR儀

二手熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天，也許對你來說，其難點不是實驗技術上的問題——而是 如何選購適合自己的熒光定量PCR儀 ——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算，更要詳細研究各種極富誘huo力的宣傳資料。面對各種不同性能的產品，您又該如何選擇呢？

首先建議大家走出認識二手熒光定量PCR儀的兩個誤區：

誤區一：儀器通道越多越好

隨著PCR技術的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，二手熒光定量PCR儀儀也不能幸免。從初期ABI公司推出的單通道二手熒光定量PCR儀儀發展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道二手熒光定量PCR儀儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區。

在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時，為了確保實驗結果的性和準確性都要在實驗中使用ROX（一種熒光染料）或的Referencedye，這些熒光染料都應單獨使用一個檢測通道。這樣以來，能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的二手熒光定量PCR儀的檢測通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認二手熒光定量PCR儀儀器的有效檢測通道尤為重要，不能單單只聽宣傳。

考慮多重二手熒光定量PCR儀的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發，多重PCR并非人人適用、人人可用，因為它使實驗復雜化了，況且大多數實驗室熒光定量實驗常年只使用SYBRGreen一種染料，實在沒有必要選購更多通道。

誤區二：real-timePCR儀無需梯度功能

對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變萬化，對于特殊片斷，經驗公式得到的數據不一定能得出準確的結果，退火溫度細微的差異對結果都可能產生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在范圍內按照梯度變化，根據結果，一步就可以摸索出適合的反應條件。

不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以優化——對于多種聚合酶混合酶擴增的多數高保真Taq酶來說這個非常重要，因為Taq和校正酶的反應溫度可能有顯著差異，優化延伸溫度就顯得很重要。

使用有梯度功能的二手熒光定量PCR儀可以一次完成以往多次實驗才能完成的優化過程，簡化了摸索PCR反應條件的繁瑣實驗，既節省實驗時間提率，又節省實驗成本。